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Les compensations

En cas d’utilisation de plusieurs fluorochromes (par exemple A et B), les spectres d’émission peuvent  être chevauchants. Il est alors nécessaire de compenser les signaux c’est à dire d’éliminer la fluorescence provenant d’un fluorochrome A dans le canal de lecture du fluorochrome B. Pour être en mesure de régler correctement les compensations, il est nécessaire de réaliser des contrôles monomarqués positifs pour chacun des fluorochromes utilisés.
Contactez vos responsables de plateaux pour optimiser les choix de fluorochromes en cohérence avec les instruments présents sur les différents plateaux.

Les principes de la cytomètrie en flux (CMF)

La CMF est définie comme l’étude précise de cellules isolées entraînées par un flux liquide. C’est une technique de caractérisation individuelle, quantitative et qualitative de particules en suspension dans un liquide.
Elle consiste à analyser les signaux optiques ou physiques émis par une particule traversant le faisceau lumineux d’un laser.

Les signaux mesurés sont essentiellement relatifs:


-aux propriétés optiques liées à la diffraction de la lumière du laser (taille, structure interne des particules)


-aux propriétés optiques induites de fluorescence obtenues par des marquages spécifiques de structures ou de fonctions cellulaires.


Ce procédé d’analyse individuelle (cellule par cellule) est multiparamètrique et peut s’effectuer à la vitesse de plusieurs milliers d’événements par seconde.
La fonction tri des cytomètres en flux permet de trier physiquement une à plusieurs populations cellulaires définies par leurs propriétés optiques.

Logiciels et outils

La plate-forme met a disposition des logiciels commerciaux pour l'analyse de données, des logiciels open source et des solutions développées sur la plate-forme MRI. Nous fournissons également l'accès à des solutions de deep-learning, y compris l'apprentissage (training) sur nos machines.

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Loupe Olympus


Tarif établissement partenaire: 5.36 €/heure
Tarif établissement public et privé : 22.32 €/heure
Technologies associées :
  • Imagerie 2D

  • Brève description :
    Stéréomicroscope / Loupe champ plein à fluorescence et brightfield

    Idéale pour l'observation, le tri ou la manipulation de gros échantillons

    Caméra couleur Sony MC5 Pro - 5Mpxl - pixel size = 3.45µm
    images N&B, couleurs, vidéos
    Filtres de fluorescence :
    - DAPI ex 350/50, em 460/50
    - TRITC ex 545/30, em 610/75
    - FITC ex 480/40, em 535/50

    Température idéale de fonctionnement entre 19 et 26°C

    Confinement L1
    

    LSR FORTESSA Becton Dickinson

    
    Tarif établissement partenaire: 25.68 €/heure
    Tarif établissement public et privé : 50.75 €/heure
    Brève description :
    Analyseur par cytométrie en flux Becton Dickinson
    4 lasers, 2 paramètres physiques et 16 fluorescences

    Contrôlé par le logiciel FACSDiVa (Becton Dickinson)
    Excitation laser bleu 488nm (50mW) :
    Filtre 1 (530/30BP) : FITC, AF488, GFP, CFSE, BB515
    Filtre 2 (685LP - 710/50BP) : PerCP, PerCPCy5.5, PerCP-eF710

    Excitation laser jaune-vert 561nm (50mW):
    Filtre 3 (585/15BP) : PE, DsRed
    Filtre 4 (600LP - 610/20BP) : mCherry, PI, PE-TexasRed, PE-CF594
    Filtre 5 (635LP - 670/30BP) : PE-Cy5, 7-AAD
    Filtre 6 (685LP - 710/50BP) : PE-Cy5.5
    Filtre 7 (750LP - 780/60BP)
    Excitation laser violet 400nm (50mW) :
    Filtre 11 (450/50BP) : BD Horizon V450, Pacific Blue, AF405, DAPI, BV421
    Filtre 12 (475LP - 525/50BP) : BD Horizon V500, Pacific Orange, AmCyan, Qdot525, BV510
    Filtre 13 (595LP - 610/20BP) : Qdot605, BV605, eF605NC, eF625NC
    Filtre 14 (630LP - 660/20BP) : Qdot655, BV650, eF650NC
    Filtre 15 (685LP - 710/20BP) : Qdot700, BV711
    Filtre 16 (750LP - 780/60BP) : BV786
    Excitation laser rouge 633nm (40mW) :
    Filtre 8 (670/14BP) : APC, AF647
    Filtre 9 (690LP - 730/45BP) : AF700, APC-R700
    Filtre 10 (750LP - 780/60BP) : APC-Cy7, APC-H7, APC-AF750, APC-eF780
    Acquisition rapide 20 000 évènements/secondes
    PMT à très haute sensibilité

    Marquage intracellulaire ou de surface, fixé ou vivant

    Laboratoire en confinement L2 totalement équipé : PSM, centrifugeuse, petit matériel
    Températures idéales de fonctionnement comprises entre 19 et 26°C
    

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    Responsable scientifique : Patrick Lemaire
    1919 route de Mende
    34293 Montpellier Cedex 5

    Directeur de la publication : Antoine Petit

    Directeur de la rédaction : Patrick Lemaire

    Hébergeur : CNRS - Centre National de la Recherche Scientifique
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    75794 Paris cedex 16 - France

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